Production of extracellular protease by a Brazilian strain of Beauveria bassiana reactivated on coffee berry borer, Hypothenemus hampei

Studies were carried out on extracellular protease production by Beauveria bassiana CG432 in liquid medium containing glucose and yeast extract. B. Bassiana presented active growth after lag period of 24 h., produced 80 percent of the total of the extracellular protease activity in 48 h which was maximum on the 5th culture day. The extracellular protease presented optimum activity at 60°C, was stable up to 1M Cl-, maintained the stability during 15 day at 4°C and -18°C, but was not stable if frozen repeatedly.

A cepa brasileira do fungo entomopatogênico Beauveria bassiana CG432 foi cultivada em meio de cultivo líquido contendo glucose e extrato de levedura a 28°C, 150 rpm, durante 9 dias utilizando 1 por cento de inóculo constituído por 10(8)conídios/mL pré-ativados em insetos vivos de broca-do-café. Avaliou-se diariamente o crescimento do fungo através da quantificação da biomassa e a atividade de proteases extracelulares no filtrado do cultivo pela determinação de peptídeos solúveis liberados pela hidrólise de soro albumina bovina a 37°C durante 30minutos. O fungo cresceu ativamente após reduzido período lag de 24 horas, produziu 80 por cento da atividade total de proteases em 48 horas e atingiu produção máxima em 5 dias de cultivo, sem adição de substratos indutores no meio de cultivo. As proteases apresentaram atividade ótima a 60°C, estabilidade até 1M de íons cloreto, mantiveram mais de 80 por cento de atividade durante 15 dias a 4°C e -18°C, porém foram sensíveis a congelamentos repetitivos.

Purification of laccases PPO-I of fungus Botryosphaeria rhodina - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v27i3.1317 / Purificação de lacases PPO-I de Botryosphaeria rhodina - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v27i3.1317

Laccases are glycoprotein polyphenol oxidases which are involved in fungal pathogenicity and they are also useful for biotechnological applications. The ligninolytic ascomycete, Botryosphaeria rhodina, has been studied as producer of exopolysaccharide and PPO-I and PPO-II laccases induced by veratryl alcohol. However, as the induced laccases have not been isolated, the aim of this study was to purify the enzyme and to identify the carbohydrates constituents of the glycosidic moiety. The fungus was cultivated on broth Vogel, 1% glucose and 30.4mM veratryl alcohol during 4.5 days at 28C/180 rpm. The extracellular fluid showed high carbohydrate concentration and the stability of PPO-I laccase under conditions of refrigeration and freezing at 4ºC-18ºC over 40 days. The purification was developed by ultrafiltration using a NMWL 100 and 30 kDa membrane, gelfiltration on Sephadex G-100, and ion-exchange chromatography on DEAE-cellulose. The purified laccase was identified as a glycoprotein, weight molecular 113 kDa, consisting of 40% protein and 60% carbohydrate identified by HPAEC-PAD as fucose, galactose, mannose, glucose and glucosamine

Lacases são glicoproteínas polifenol oxidases envolvidas na patogenicidade de alguns fungos e úteis em processos biotecnológicos. O ascomiceto ligninolítico Botryosphaeria rhodina tem sido estudado como produtor de exopolissacarídeos e de lacases PPO-I e PPO-II induzidas pelo álcool veratrílico. Como as lacases produzidas ainda não foram isoladas, o objetivo deste trabalho foi purificar lacases PPO-I e identificar os carboidratos constituintes da porção glicosídica. O fungo foi cultivado em meio mínimo de Vogel contendo 1% de glicose e 30,4 mM de álcool veratrílico, a 28C e agitação de 180 rpm durante 4,5 dias. O extrato livre de células apresentou elevada concentração de carboidratos e de PPO-I estáveis a 4ºC e -18ºC durante 40 dias. Técnicas de ultrafiltração, cromatografia em gel Sephadex G-100 e em resina DEAE-Celulose purificaram lacases PPO-I com peso molecular de 113 kDa por eletroforese PAGE-SDS, contendo 40% de proteínas e 60% carboidratos identificados por HPAEC-PAD como fucose, galactose, manose, glucose e glucosamina

Atividade dos inibidores de `alfaï-amilase do triticale parcialmente purificados sobre amilases de Acanthoscelides obtectus e Tenebrio molitor / Activity of `alphaï-amilase inhibitors from triticale partially purified on the Acanthoscelides obtectus and Tenebrio molitor amylases

Inibidores de `alfaï-amilase do triticale (Triticum x secale) foram purificados parcialmente através de fracionamento com sulfato de amônio, filtração em gel sobre Sephadex G-100 e cromatografia em DEAE-Celulose, e foram denominados como 23`B IND. 2ï, 54`B IND. 4ï e 23`C IND. 1ï, conforme variedade de triticale utilizada e ordem de eluição nas colunas cromatográficas. Os inibidores não apresentaram carboidratos na estrutura e os pesos moleculares aparentes foram estimados em 31,3, 30,2 e 27,6 kDaltons, respectivamente. Sob condições dissociantes observou-se uma banda com peso molecular estimado em 14 kDaltons, indicando duas subunidades polipeptídicas semelhantes. Os valores de pH isoelétrico foram 5,62 (23`B IND. 2ï) e 5,15 (54`B IND. 4ï)...